Prøveforberedelse:
Prøvesamling: Samle prøver som blod, vev, spytt og urin i henhold til eksperimentet.
DNA -ekstraksjon: Bruk et dedikert DNA -ekstraksjonssett for å trekke ut DNA fra prøven.
PCR -reaksjonsforberedelse:
Designprimere: Designspesifikke primerpar basert på målsekvensen for amplifisering av mal -DNA.
Forbered reaksjonsblanding: inkludert mal -DNA, primere, buffer, DNA -polymerase, DNTPs (deoksynukleosid trifosfater), Mg 2+, etc.
Sett PCR -program:
PCR -instrumentinnstillinger: Angi de forhåndsinnstilte PCR -syklusparametrene, for eksempel 95 graders forvarmingstemperatur, denatureringstemperatur (for eksempel 95 grader), annealingstemperatur (for eksempel 55 grader), forlengelsestemperatur (for eksempel 72 grader) og antall sykluser.
PCR -reaksjon:
Tilsett prøve: Tilsett reaksjonsblandingen i PCR -reaksjonstanken eller CHIP, og hver prøve har vanligvis en reaksjon godt.
Utfør PCR: PCR -instrumentsyklusene i henhold til det forhåndsinnstilte programmet, inkludert oppvarming, kjøling, annealing og utvidelsestrinn.
Produktanalyse:
Kjøling etter amplifisering: Etter at PCR er fullført, avkjøles prøven kort ved 4 grader.
Elektroforetisk separasjon: Bruk gelelektroforeseteknologi, for eksempel agarosegelelektroforese, for å skille PCR -produkter med forskjellige lengder.
Fluorescensskanning: Fluorescerende merkede primere avgir lys av en spesifikk bølgelengde i det forsterkede produktet, og PCR -instrumentet leser disse signalene og registrerer dem.
Databehandling og tolkning:
Dataanalyseprogramvare: Bruk spesialisert programvare for å analysere fluorescerende signal og beregne konsentrasjonen eller den relative konsentrasjonen av målfragmentet.
Resultattolkning: Basert på PCR -kurven og baseline, bestemme om PCR er vellykket, om målfragmentet eksisterer, og hvor mye det er.
Resultatopptak og bevaring:
Registrer resultatene i den eksperimentelle rapporten og bevar de opprinnelige dataene og prøvene på riktig måte.